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发布时间:2021-11-12 22:50:30
荧光分光光度计测试注意事项
①样品应盛在四面透光的石英比色皿(荧光池)中,如果是挥发性样品应使用带塞的荧光池。
②在荧光分析时,为了得到稳定且可靠的数据,一般需要开机预热氙灯大约30min。如果仪器光源采用的是闪烁氙灯,预热时间可以缩短到10min左右。对某些易感光、易分解的荧光物质,尽量采用长波长、低人射光强度及短时间光照。
③温度变化可引起荧光强度的改变。通常降低温度,有利于提高荧光量的子产率,荧光强度增大。温度影响荧光强度的显著程度因样品而异,大部分荧光物质的荧光强度受温度影响不大,测试温度变化不超过±3℃,对测试结果几乎无影响。
④当荧光物质是弱酸或弱碱时,溶液的pH对荧光强度有较大影响。因为弱酸或弱碱在不同酸度中,分子和离子的电离平衡会发生改变,而荧光物质的荧光强度会因其离解状态发生改变。
⑤分子结构中存在π-π共轭的荧光物质在极性溶剂中,荧光效率显著增强。溶液中表面活性剂的加入能够显著提高荧光强度。
⑥瑞利散射和拉曼散射是溶剂的两种散射光,应注意不要误把瑞利散射和拉曼散射光谱当做荧光光谱。瑞利散射光波长与激发光波长相同,拉曼散射与激发光波长不同,而荧光物质的荧光波长与激发光波长无关,因此可以通过选择适当的激发波长将拉曼散射光与荧光分开。在测试时选择合适的狭缝宽度,或者空白扣除,也可以对散射光的影响进行校正。
⑦荧光物质分子与溶液中其它物质分子之间作用导致荧光强度降低,常见的荧光猝灭剂,如卤素离子、***离子、硝基化物质、重氮化合物等。
⑧测试过程中注意不要肉眼盯着氙灯光源看,以防眼睛造成损伤。
⑨仪器房应注意经常通风,避免产生的臭氧在室内富集。
浅析荧光光谱
无论分子初处于哪一个激发单重态,通过内转换及振动弛豫,均可返回到激发单重态的低振动能级,然后再以辐射形式发射光而返回至基态的任一振动能级上,这时发射的光称为荧光。由于振动弛豫和内转换损失了部分能童,故荧光的波长总比激发光波长要长。发射荧光的过程为 秒。由于电子返回基态时可以停留在基态的任一振动能级上,因此得到的荧光谱线有时呈现几个非常靠近的峰。通过进一步振动弛豫,这些电子都很快地回到基态的低振动能级。
荧光概论
物体经过较短波长的光照,把能量储存起来,然后缓慢发出较长波长的光,发出的这种光就叫荧光。物质在吸收入射光的过程中,光子能量传递给物质分子。分子被激发,电子从较低能级跃迁到较高能级,形成电子激发态分子。电子的激发态的多重态用2s+1表示,s为自旋角动量数的代数和,数值为0或1。分子中同一轨道里所占据的两个电子必须具有相反的自旋方向,即自旋配对。分子中全部电子都自旋配对,即s=0,该分子处于单重态,用S表示。若分子吸收能量后电子跃迁过程中不发生自旋方向的变化,这时分子处于激发的单重态;若跃迁伴随自旋方向改变,这时分子具有两个自旋不配对的电子,即s=1,分子处于激发的三重态,符号T表示。符号S0、S1和S2分别表示分子的基态、和第二电子激发单重态,T1和T2则分别表示和第二电子激发三重态。
荧光光谱的分析
分析方法 语音物质吸收电磁辐射后受到激发,受激原子或分子以辐射去活化,再发射波长与激发辐射波长相同或不同的辐射。当激发光源停止辐照试样之后,再发射过程立即停止,这种再发射的光称为荧光;若激发光源停止辐照试样之后,再发射过程还延续一段时间,这种再发射的光称为磷光。荧光和磷光都是光致发光。原子荧光光谱分析法具有很高的灵敏度,校正曲线的线性范围宽,能进行多元素同时测定。这些优点使得它在冶金、地质、石油、农业、生物***、地球化学、材料科学、环境科学等各个领域内获得了相当广泛的应用。
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